aspiryna z antybiotykiem

Nasze odkrycia pokazują, że SOD1 kontrolowała hydrolizę GTP przez Rac1 poprzez oddziaływanie zależne od redoks, niezwiązane z modyfikacją Rac1 za pośrednictwem H2O2. W tym kontekście, gdy SOD1 był związany z Rac1 w warunkach redukujących, hydroliza GTP przez Rac1 była zahamowana. Jednak w warunkach utleniających SOD1 oddzielił się od Rac1 i nie hamował wewnętrznej hydrolizy GTP przez Rac1. Mutowane formy SOD1 ALS silniej związane z Rac1 i były mniej wrażliwe na rozprzęganie redox. Te interakcje SOD1 / Rac1 stworzyły zależny od redoks czujnik do aktywacji zależnych od Rac1 oksydaz NADPH i produkcji O2 przez endomembrany. Co ważne, ten obwód regulacyjny został zakłócony przez rodzinne mutacje związane z ALS. W SOD1. W związku z tym proponujemy model, w którym SOD1 może bezpośrednio regulować aktywację Noxa, działając jako czujnik redox do inaktywacji Rac1. Odkrycia takie mogą pomóc wyjaśnić wzmocnienie funkcji stwierdzone w rodzinnych mutacjach ALS SOD1 związanych ze zwiększonym stresem redoks. Wyniki Mutacje SOD1 związane z ALS aktywują komórkową aktywność Nox. Postawiliśmy hipotezę, że mutant ALS SOD1, ale nie WT SOD1, bezpośrednio dysreguluje produkcję O2 pochodzącej od Nox. Rzeczywiście, analiza transgenicznych myszy z nadekspresją SOD1WT lub SOD1G93A wykazała, że tylko zmutowana postać SOD1 wzmocniła zależny od NADPH O2 produkcja w endomembranach i tkance mózgowej i rdzenia kręgowego (Figura 1, A i B) i że hamowano to za pomocą inhibitora flawoproteinowego chlorku difenylenodiodionowego (DPI), ale nie inhibitora mitochondrialnego kompleksu o nazwie rotenon (Suplementowa Figura 1, A i B; materiał uzupełniający dostępny online z tym artykułem; doi: 10.1172 / JCI34060DS1). Co ciekawe, wątroba, narząd, który nie wykazuje znaczącej patologii w ALS, również wykazał podobne wzrosty aktywności Nox związane z mutacją SOD1 (Figura 1A). Figury Mutacje SOD1 związane z 1ALS aktywują komórkową aktywność Nox. (A) Stopa O2 zależna od NADPH. wytwarzanie przez całkowite endomembrany izolowane z mózgu, rdzenia kręgowego i wątroby nietransgenicznych lub transgenicznych myszy z nadekspresją SOD1WT lub SOD1G93A (średnia . SEM; n = 3 na grupę). (B) Wykrywanie fluorescencyjne DHE O2 w odcinkach odcinka lędźwiowego rdzenia kręgowego od myszy nietransgenicznych i transgenicznych z nadekspresją SOD1WT lub SOD1G93A. Barwienie DAPI pokazuje jądra komórkowe w każdej sekcji. (C) Wskaźnik O2 zależny od NADPH. wytwarzanie w całkowitej endomembranach izolowanych z SH-SY (neuron) lub MO59J (glejowych) komórek po 48 godzinach po zakażeniu wektorami adenowirusowymi eksprymującymi LacZ, SOD1WT, SOD1L8Q lub SOD1G93A. (D) Śmierć komórek oznaczono ilościowo w komórkach SH-SY i MO59J przy użyciu trypanowego wykluczenia niebieskiego po 72 godzinach po zakażeniu wskazanymi wektorami adenowirusowymi. (E) Stosując warunki określone w C i D, szybkość O2 zależnego od NADPH. wytwarzanie i śmierć komórek oceniano w obecności lub pod nieobecność inhibitora Nooks apocyny (100 .M). Wartości są średnie. SEM (n = 6 na grupę). (F) Ocena związanego z GTP Rac1 (aktywowanej postaci) w lizatach rdzenia kręgowego od 2 nietransgenicznych lub 3 transgenicznych myszy SOD1G93A (120 dni) i z komórek MO59J z nadekspresją WT lub zmutowanych białek SOD1 (36 godzin po zakażeniu adenowirusowym). Dwie lewe ścieżki są kontrolami do testu aktywacji Rac, w którym nietransgeniczne lizaty rdzenia kręgowego preinkubowano ze wskazanymi nie ulegającymi hydrolizie analogami nukleotydów guaniny. Aby ocenić, czy zmutowane białka SOD1 zwiększają aktywność Nox bezpośrednio w nieobecności związanych z chorobą procesów zapalnych obserwowanych in vivo u myszy ALS, eksprymowaliśmy formy WOD, L8Q i G93A SOD1 w obu komórkach glejowych MO59J i komórkach neuronowych SH-SY przy użyciu rekombinantów adenowirusy. Nadekspresja tylko zmutowanych białek SOD1 wzmocniła zależne od NADPH O2. produkcja w endomembranach zarówno z komórek glejowych, jak i neuronalnych (ryc. 1C) i znacznie zwiększona śmierć komórek (ryc. 1D)
[podobne: pieprzyca siewna, bazofile poniżej normy, allegro dla gołębi ]