densytometria cena warszawa

Ponieważ aktywność FVIII w osoczu jest niewykrywalna u myszy hemofilii typu A, postawiliśmy hipotezę, że przeszczepione komórki LSEC wytwarzające i uwalniające dostateczne ilości FVIII we krwi będą skutkowały poprawą terapeutyczną hemofilii A. Te myszy z nokautem FVIII stanowią doskonały model do adresowania terapii komórkowej w hemofilii A ( 27-29). Przeszczepiliśmy zdrowe LSEC wyrażające FVIII od dawców FVB / N-Tie2 . GFP przez żyłę wrotną do hemofilii. Myszy tat krzyżowano krzyżowo 10-krotnie z myszami NODCB17-Prkdcscid / J z niedoborem T i B. Dokonano tego w celu wyeliminowania możliwości odpowiedzi immunologicznej przeciwko FVIII wydzielanej przez przeszczepione komórki, jak również przeciwko samym przeszczepionym komórkom. Podaliśmy MCT myszom z hemofilią A (n = 31) od do 2 dni przed przeszczepieniem komórek. Aby wykonać operację u tych myszy, podawano 4 jednostki rekombinowanego ludzkiego FVIII jeden raz, który wykazuje końcowy okres półtrwania 4,1 godziny u myszy (30). Dwie myszy zmarły przed osiągnięciem 1-miesięcznego punktu czasowego i zostały utracone do analizy. Następnie, w zestawie badań, zbadaliśmy tkanki i osocze od 16 zwierząt miesiąc po przeszczepieniu LSEC, chociaż osocze od z tych zwierząt zostało utracone podczas pobierania próbek. RT-PCR wykazał mRNA FVIII w wątrobie praktycznie wszystkich myszy (Figura 6A). Ponownie, zidentyfikowaliśmy przeszczepione LSEC z GFP i CD31, różne od komórek Kupffera reagujących na F4 / 80 (Figura 6, B i C, i Figura 3, G (N)). Względna obfitość wątrobowych mRNA FVIII korelowała z częstością występowania przeszczepionych LSECs w wątrobie myszy hemofilnych. Wykazaliśmy aktywność FVIII w osoczu przy użyciu czułego testu fluorogenicznej generacji trombiny (31), arbitralnie stosując rygorystyczne odcięcie ponad 10% aktywności czynnika VIII w osoczu, aby określić korektę terapeutyczną. Stwierdzono istotną korelację pomiędzy całkowitym nasileniem reopulacji wątroby z przeszczepionymi LSEC a aktywnością FVIII w osoczu. Nasze kryterium korekty terapeutycznej wskazało, że przeszczep zdrowych osób z LSEC skorygował hemofilię A u 13 z 15 myszy (87%). Średnia aktywność FVIII u tych myszy wynosiła 19%. 4% normalnej aktywności osocza (zakres: 14%. 25%) (Figura 6D). U 2 myszy, u których stwierdzono brak korekty terapeutycznej, aktywność FVIII była albo niewykrywalna, albo tylko 7%. Przeszczepione komórki były mniej powszechne w wątrobie tych 2 myszy w porównaniu z myszami wykazującymi korektę terapeutyczną. Figura 6 Terapeutyczna skuteczność przeszczepionych LSECs u myszy hemofilia A NOD / SCID. (A) Analiza RT-PCR całkowitego RNA wątroby wykazującego mRNA FVIII u praktycznie wszystkich leczonych myszy (ścieżki 2. 13). Próbki analizowano pod kątem p-aktyny równolegle w celu sprawdzenia integralności RNA. Ścieżka 1, kontrola negatywna z samym tylko mieszaniną PCR; ścieżka 14, zdrowe RNA z wątroby myszy jako kontrola pozytywna. (B) Immunobarwienie wątroby wykazujące przeszczepione FVB / N-Tie2a GFP LSEC w myszy NOD / SCID z hemofilią A (zielone) z koekspresją markera śródbłonka CD31 (czerwone w natywnych komórkach, żółte w przeszczepionych komórkach). (C) Komórki z przeszczepionymi dodatnimi GFP (zielone) różniące się od komórek Kupffera wyrażających F4 / 80 (czerwone). (D) Aktywność FVIII w osoczu u myszy hemofilia NOD / SCID miesiąc po przeszczepie LVS FVB / N-Tie2a GFP z korekcją terapeutyczną wymagającą więcej niż 10% FVIII w osoczu. Oryginalne powiększenie, × 200 (B i C). U myszy z hemofilią A poddanych przeszczepieniu LSEC, antygen FVIII pojawił się we krwi (Figura 7A), co odpowiadało zwiększonej aktywności FVIII w osoczu. Nie wykryliśmy przeciwciał przeciwko FVIII u myszy z hemofilią A leczonych zdrowymi LSEC. Ponieważ myszy NOD / SCID nie mają wewnętrznej zdolności do wzbudzania odpowiedzi przeciwciał z powodu braku komórek B (i T), oczekiwano tego. Aby zweryfikować, że poziomy FVIII w osoczu zwiększają się progresywnie u myszy hemofilii A podczas proliferacji przeszczepionych LSEC, próbki krwi otrzymywaliśmy seryjnie w innym zestawie myszy w okresie do 2 miesięcy (Figura 7B).
[więcej w: urobilinogen w moczu norma, ból pod lewą łopatką przyczyny, babka płesznik dawkowanie ]