echo serca waryńskiego warszawa

Aby ustalić, że indukowane przez MCT uszkodzenie śródbłonka w dodatkowych łożyskach naczyniowych nie sprzyjało przeżywaniu przeszczepionych LSEC w pozawątrobowych lokalizacjach, przebadaliśmy tkanki pod kątem transgenu GFP za pomocą PCR. Stwierdziliśmy, że przeszczepione LSEC nadal były ograniczone do wątroby u zwierząt leczonych MCT (Suplementowa Figura 1, materiał uzupełniający dostępny online w tym artykule; doi: 10.1172 / JCI32748DS1). Wskazuje to, że badania dotyczące długoterminowego losu przeszczepionych komórek w wątrobie były odpowiednie. Rekonstytucja śródbłonka przez przeszczepione FECB / N-Tie2-GFP LSECs. W celu oceny stopnia krótkoterminowej i długoterminowej rekonstytucji śródbłonka przez przeszczepione LSG FVB / N-Tie2a GFP, wyizolowaliśmy komórki wątroby z wielu zwierząt za pomocą trawienia enzymatycznego, a następnie analizy cytometrii przepływowej. W tydzień po przeszczepieniu LSEC, u myszy bez wstępnego leczenia MCT przeszczepione komórki stanowiły 0,3%. 0,1% z nie-miąższowej frakcji wątroby pozbawionej hepatocytów (komórek niemiąższowych [NPC]) (Figura 2A). Ta przeszczepiona frakcja komórkowa była stała u myszy bez MCT przez miesiąc, co wskazuje na brak przeszczepionej proliferacji komórek (Figura 2B). Jednak u myszy, którym podawano MCT przed przeszczepieniem komórek, liczba przeszczepionych LSEC była średnio 4-krotnie większa po tygodniu, co wskazuje na lepsze wszczepienie komórek, a przeszczepione LSEC proliferowały, aby stanowić 9% NPC po 3 miesiącach (Figura 2, D. FA). Wykazaliśmy ekspresję CD31 w przeszczepionych komórkach GFP-dodatnich w celu zweryfikowania ich śródbłonkowej tożsamości (Figura 2, G. I). Łączna analiza tych danych wykazała ponad 30-krotny wzrost liczby przeszczepionych komórek w czasie (tab. 1). Analiza tkankowa za pomocą barwienia GFP wykazała dużą liczbę przeszczepionych LGF dodatnich pod względem GFP w wątrobie i 3 miesiące po transplantacji komórek (Figura 1, LsS). Figura 2: Analiza cytometryczna w celu zidentyfikowania reisolowanych transplantowanych komórek FVB / N-Tie2a GFP jako frakcji całkowitej nie-miąższowych komórek wątroby. (A) Pokazano komórki GFP-dodatnie u myszy nietraktowanych MCT, z przeszczepionymi komórkami stanowiącymi mniej niż 0,5% NPC po tygodniu i miesiącu. Pokazano mysz kontrolną ujemną bez transplantacji komórek. (B) Górne panele pokazują komórki GFP-dodatnie u myszy traktowanych MCT, w których liczba przeszczepionych komórek wzrastała progresywnie, osiągając do 11% NPC po 3 miesiącach. Niższe panele pokazują, że komórki GFP-dodatnie również były CD31-dodatnie. Tabela Skumulowana analiza transplantowanej frakcji LSEC Integralność strukturalna i funkcjonalna przeszczepionych LSEC w wątrobie. Następnie ustaliliśmy strukturalną i funkcjonalną integralność rekonstytuowanego śródbłonka wątrobowego po przeszczepie LSEC. Transmisyjna mikroskopia elektronowa (TEM) wykazała, że przeszczepione LSECs zostały prawidłowo zintegrowane ze śródbłonkiem wątroby z przestrzenią Disse interweniującą między LSEC a hepatocytami (Figura 3A). Aby zademonstrować endocytozę za pośrednictwem receptora przez przeszczepione receptory LSEC, która jest fizjologiczną funkcją ECs, podaje się myszom znakowanym fluorescencyjnie znakowanym 1,1-dioktadecylo-3,3,3,3-tetrametyloindokarbocyjaninem-acylowanym LDL (DiI-Ac -LDL) (23). Przeszczepione LSEC inkorporowały DiI-Ac-LDL 1, 3 i 7 dni po transplantacji komórek, a następnie przez 3-miesięczny czas trwania naszych badań, w tym u myszy z rozległą proliferacją przeszczepionych komórek (Figura 3, B. F). W teście tym ustalono, że przeszczepione LSEC były funkcjonalnie nietknięte od samego początku. Ponownie sprawdziliśmy, że przeszczepione LSEC posiadają charakterystyczne markery błonowe śródbłonka, np. CD31 (Figura 3, G. J) i różnią się od innych komórek w sinusoidach wątroby, np., Komórki Kupffera, które wykazują antygen F4 / 80 (Figura 3, K. N)
[przypisy: babka płesznik dawkowanie, badanie trus, logopedia lublin ]