ekuz nfz bydgoszcz

Zwierzęta biorcy poddawano analizie przedziałowej w celu identyfikacji przeszczepionych LSECs w wątrobie przy użyciu immunobarwienia dla GFP (Figura 1, H. K). Początkowo ustaliliśmy, czy dawcy LSEC będą efektywnie wszczepiać wątrobę myszy po transplantacji. Natychmiast po transplantacji LSEC rozprowadzano w wątrobowych sinusoidach, a po 3. 7 dniach transplantowane LSEC były zintegrowane w strukturze wątroby i wszczepione w warstwę EC wiążącą sinusoidy w wątrobie. Analiza wykazująca długoterminowy los komórek w kolejnych okresach 2 tygodni oraz 1, 2 i 3 miesięcy wykazała, że przeszczepione LSEC przeżyły w wątrobie i różniły się od innych sinusoidalnych komórek wątroby przez cały czas trwania naszych badań (ryc. 1, L. S). Aby zmierzyć, która frakcja przeszczepionych LSEC została wszczepiona i przetrwała w długim okresie, wyizolowaliśmy komórki wątrobowe poprzez enzymatyczne trawienie myszy z przeszczepionymi FVB / N-Tie2 . GFP LSEC, a następnie analizą cytometrii przepływowej komórek wykazujących ekspresję GFP. Wykazało to, że przeszczepione EC stanowi mniej niż 0,5% całkowitej sinusoidalnej frakcji WE wątroby (patrz poniżej). Ponieważ obserwowany zakres rekonstytucji śródbłonka (<0,5%) byłby prawdopodobnie mniejszy niż terapeutyczny, następnie zbadaliśmy, czy można wszczepić wszczepienie LSEC. Aby modulować przeszczepienie przeszczepionych komórek, zastosowaliśmy skonstruowany polimer fibronektynowy (FLP), więc można zająć się zasadą ukierunkowywania mediowanych receptorów LSEC na śródbłonek wątroby, jak wykazano wcześniej w przypadku celowania wątrobowego dojrzałych hepatocytów (16). Alternatywnie, podawaliśmy genotoksyczny alkaloid pirolizydynowy, monokrotalinę (MCT), który zakłóca sinusoidalną barierę śródbłonka i ułatwia włączenie przeszczepionych hepatocytów do miąższu wątroby (17. 19). Uzasadnienie tego ostatniego podejścia opierało się na fakcie, że MCT jest silną toksyną dla EC i powoduje rozległe zakłócenia endotelii u nietkniętych zwierząt (20, 21). Aby stępić potencjalne odpowiedzi immunologiczne gospodarza przeciwko reporterowi GFP u tych immunokompetentnych myszy FVB / N, w naszych badaniach włączono podawanie cyklofosfamidu w małej dawce, który w wysokich dawkach może dodatkowo zubożać makrofagi i rozerwać śródbłonek (22). Zaobserwowaliśmy, że u myszy leczonych FLP poprawiła się wewnątrzwątrowa retencja przeszczepionych LSEC, a także nastąpiła umiarkowana poprawa wszczepienia komórek w porównaniu z myszami kontrolnymi (Figura 1, I i J). Z drugiej strony, wszczepienie LSEC myszom traktowanym MCT wzrosło kilkakrotnie w porównaniu z nieleczonymi kontrolami (Figura 1K). Odkryliśmy, że po pojedynczej dawce MCT u biorców przed przeszczepieniem komórek liczba zdrowych, GFP przeszczepionych LSEC wzrosła stopniowo w ciągu 3 miesięcy, wskazując na początek przeszczepionej proliferacji komórek (Figura 1, LsS). Było to współmierne do długotrwałych zaburzeń w wątrobie zwierząt biorących LSEC, które były narażone na MCT. Chociaż 48 godzin po MCT, przed przeszczepieniem komórek, poziomy aminotransferazy alaninowej w surowicy były nieznacznie podwyższone (~ 3-krotnie), co wskazuje na ostre uszkodzenie wątroby, i 2 tygodnie po transplantacji komórek, poziomy aminotransferazy alaninowej w surowicy były prawidłowe. Co więcej, nie zaobserwowaliśmy żadnych dowodów na wątrobową okluzję sinusoidalną na poziomie morfologicznym u badanych zwierząt w krótkim i długim okresie. Odkrycie postępującej proliferacji w przeszczepionych LSEC sugerowało, że natywne komórki śródbłonka wątroby cierpiące na uszkodzenia indukowane przez MCT były niekorzystne pod względem konkurencyjności w porównaniu z przeszczepionymi zdrowymi komórkami (patrz poniżej). W poprzednich badaniach trwających do 7 dni ustaliliśmy, że LSECs przeszczepione do wątroby za pomocą wstrzyknięcia żyły wrotnej przetrwały tylko w wątrobie, bez redystrybucji do innych narządów, np. Płuc, serca, śledziony, nerek lub jelit (8) [przypisy: ashwagandha skutki uboczne, allegro dla gołębi, bol pod lewa lopatka ]