laryngolog kwiatek

GRK fosforylują reszty Ser / Thr wewnątrzkomórkowych pętli i / lub ogona C receptora aktywowanego agonistą, proces, który zwiększa powinowactwo receptora do arestyny. Donosi się, że niewizualna (3-arestyna1 i -2 oddziałują z wewnątrzkomórkowymi domenami CXCR4 i regulują desensytyzację i internalizację receptorów (8. 11). Znanych jest siedem GRK, a wśród nich 4 szeroko wyrażane elementy (GRK2, -3, -5 i -6) mają regulować większość GPCR z zachodzącymi na siebie specyficznymi receptorami (12, 13). Badania nad chorobami ludzkimi i genetycznie zmodyfikowanymi zwierzętami ujawniły niedawno fizjologiczną rolę GRK i wskazały na pewną swoistość tych kinaz w regulacji sygnalizacji GPCR (omówiona w odnośniku 14). Jednakże, do tej pory, GRK odpowiedzialne za promowaną przez agonistę fosforylację, desensytyzację i / lub endocytozę CXCR4 pozostają scharakteryzowane, chociaż pewne zmiany funkcji CXCR4 zostały ujawnione u myszy bez Grk6 (10, 15). W pracy tej identyfikujemy GRK3 jako kluczowy regulator atenuacji CXCR4, którego upośledzona aktywność w komórkach WHIMWT odpowiada za wzmocnienie odpowiedzi zależnych od białka G za pośrednictwem CXCR4. Wyniki Selektywne dysfunkcje CXCR4 w komórkach WHIMWT. Otrzymaliśmy fibroblasty skóry przedramienia od pacjenta WHIMWT 3 (P3) i P4 i wytworzyliśmy linię komórek B transformowanych EBV od P4 (6), w celu ustawienia modeli komórkowych do wyszukiwania anomalii odpowiedzialnych za dysfunkcje CXCR4. Poziomy ekspresji błonowej endogennego CXCR4 były ledwo wykrywalne we wszystkich typach komórek (Figura 1A), podobnie jak inne receptory chemokin, w tym CCR5, CCR7, CXCR2, CXCR5 i CXCR7, nowo zidentyfikowany receptor dla CXCL12 (16) (dane nie przedstawione) . Po transdukcji analizowaliśmy poziomy ekspresji osiągnięte przez CXCR4 na błonie WHIMWT i kontrolnej fibroblastach i komórkach B lub komórkach CHO z negatywnym CXCR4 i komórkach T T0.01. Analiza metodą cytometrii przepływowej wykazała, że poziomy ekspresji CXCR4 były porównywalne na powierzchni wszystkich transdukowanych typów komórek i w tym samym zakresie co endogenne wykrywane w pierwotnych komórkach T CD4 + lub komórkach T Jurkat (Figura 1B). Zgodnie z tym, immunodetekcję wytrąconych receptorów CXCR4 osiągnięto tylko w transdukcji kontrolnej i komórkach WHIMWT EBV-B i zwiększeniu w transdukcji PBL od zdrowego osobnika. Analiza immunoblot (IB) ujawniła prążki o masie cząsteczkowej bliskiej do oczekiwanej dla CXCR4, co potwierdzono w komórkach T A0.01 wyrażających CXCR4 lub jego skrócony odpowiednik C-CXCR43013 (odpowiednio około 39 i ~ 36 kDa) (Figura 1C). . Figura Analiza ekspresji CXCR4 w komórkach pochodnych WHIMWT. (A) Poziomy ekspresji błonowej endogennego CXCR4 w fibroblastach i komórkach EBV-B od osób zdrowych (CTRL), P3 i P4 (górne panele) określano za pomocą cytometrii przepływowej przy użyciu skoniugowanego z PE 12G5 mAb anty-CXCR4 (białe histogramy) i w porównaniu z barwieniem kontrolnym mierzonym w liniach komórkowych CHO i A0.01 CXCR4 (dolne panele). Szare histogramy odpowiadają kontroli izotypowej Ab. (B) Poziomy ekspresji endogennego CXCR4 w komórkach T CD4 + w komórkach od zdrowego dawcy i linii komórek Jurkat T (lewe panele) porównano z ekspresją eXktóryczną CXCR4 po transdukcji fibroblastów, komórek EBV-B, CHO i A0 .01 linie komórkowe (środkowe i prawe panele) z cDNA CXCR4 WT lub mutantem (1013). (C) Lizaty komórek EBV-B od osobników CTRL i P4, limfocyty T A0.01 i PBL od zdrowego osobnika, nietransdukowanych (NT) lub transdukowanych cDNA CXCR4WT (WT) lub CXCR41013 (1013), inkubowano z mAb 12C5 anty-CXCR4 wstępnie powleczone perełkami sepharose typu a-5b . Immunodetekcja wytrąconych receptorów przy użyciu przeciwciała anty-CXCR4 SZ1567 ujawniła prążki o masie cząsteczkowej zbliżonej do oczekiwanej dla CXCR4WT i CXCR41013 (odpowiednio ~ 39 i ~ 36 kDa)
[hasła pokrewne: bol pod lewa lopatka, bazofile niski poziom, bańki chińskie allegro ]