łupież na nogach

Poziom FVIII w osoczu wzrastał w miarę upływu czasu w związku ze zwiększoną reopulacją wątroby za pomocą przeszczepionych komórek. Ta analiza wykazała, że aktywność czynnika VIII w osoczu wzrosła z 19%. 11% po 2 tygodniach do 36%. 16% po 2 miesiącach po transplantacji komórek, chociaż różnica nie osiągnęła istotności statystycznej ze względu na zmienność między zwierzętami. Niemniej jednak, aktywność FVIII w osoczu nie została utracona u żadnej z myszy hemofilii A, co wskazuje na utrzymującą się funkcję przeszczepionych komórek. Figura 7 antygen FVIII u myszy z hemofilią A z przeszczepioną LSEC i seryjną analizę aktywności FVIII u biorców komórek. (A) myszy z hemofilią A miesiąc po przeszczepie LVS FVB / N-Tie2a GFP z korekcją terapeutyczną. Neg Ctr, nieleczona mysz z hemofilią typu A. Każdy pasek reprezentuje poziom antygenu FVIII z indywidualnej myszy po transplantacji komórek. (B) Aktywność FVIII w osoczu u myszy z hemofilią A po przeszczepie komórek, pokazująca seryjne krwawienie od 7 myszy, rozpoczynające się 2 tygodnie po operacji w ciągu 60 dni, z korektą terapeutyczną wymagającą więcej niż 10% FVIII w osoczu. Mysz oznaczono jako pozorowany tylko sam nośnik. Przywrócenie aktywności FVIII w osoczu powinno skorygować fenotyp krwawienia u myszy z hemofilią A. Zostało to zbadane w innym zestawie badań. U myszy z hemofilią typu A, 2 miesiące po przeszczepieniu LSEC, krwawienie wywołane cięciem ogonowym zatrzymało się po 15. 120 minutach, a 6 z myszy hemofilii A przeżyło (100%). Przeciwnie, u nieleczonych myszy z hemofilią kontrolną kontynuowano krwawienie i okazało się śmiertelne. Spodziewaliśmy się, że u myszy z hemofilią typu A, inne czynniki krzepnięcia i kofaktory będą eksprymowane normalnie, np. VWF lub czynnik krzepnięcia IX (FIX), ponieważ żaden inny gen nie został zaburzony. Zostało to wykazane przez obecność mRNA vWF i FIX (Figura 8A), jak również białko vWF w LSECs z myszy hemofilii A (Figura 8, B i C, i Supplemental Video 3 przedstawiające mikroskopię konfokalną). Podobnie, myszy hemofilia A poddane przeszczepowi LSEC również wyrażały vWF (Figura 8D). Trudno było stwierdzić, czy przywrócenie ekspresji FVIII u tych zwierząt miało przeciwregulacyjne działanie na ekspresję vWF. Na koniec, aby ustalić, czy EC w innych narządach może dać szansę na odtworzenie niedoboru FVIII, zbadaliśmy ekspresję FVIII w kilku narządach (Figura 8E). FVIII mRNA był obecny w śledzionie, płucach i szpiku kostnym, chociaż na niższych poziomach niż w wątrobie. Aby zabezpieczyć możliwość przeszczepu komórek, wyizolowaliśmy EC z śledziony myszy przez immunomagnetyczne sortowanie komórek. Jednakże wydajność EC śledziony była bardzo ograniczona i mogliśmy wyizolować mniej niż 5 x 105 EC ze śledziony, co ograniczyło badania in vivo. Figura 8 Ekspresja czynników krzepnięcia w EC. (A) RT-PCR całkowitego RNA wątroby dla FVIII, FIX i vWF. Ścieżka 1, wątroba od zdrowej myszy FVB / N; ścieżka 2, wątroba myszy hemofilia A; ścieżka 3, LSECs ze zdrowej myszy FVB / N; ścieżka 4, hepatocyty od zdrowej myszy FVB / N; i ścieżkę 5, sam mix PCR. (B i C) Immunobarwienie hemofilii NOD / SCID Mysia wątroba wykazująca koekspresję markera śródbłonka CD31 (czerwony) i vWF (zielony) w wątrobowych sinusoidach; komórki wyrażające oba wydają się żółte. C pokazuje powiększenie obszaru pudełkowego w B. Nuclei wybarwiono DAPI (niebieski). W B, mikroskopia konfokalna demonstruje ekspresję vWF w LSECs kosztownych dla CD31. Pasek skali: 24 m (B). Oryginalne powiększenie × 630 (C). (D) RT-PCR całkowitego RNA wątroby wykazującego ekspresję mRNA vWF. Ścieżka 1, LSK dawcy FVB / N dawcy; ścieżka 2, hemofilia A mysia wątroba; ścieżka 3, wątroba FVB / N; ścieżki 4. 7, wątroba myszy hemofilnych po przeszczepieniu LSEC. (E) RT-PCR całkowitego RNA dla ekspresji FVIII
[hasła pokrewne: wodniak powrózka nasiennego, neurologopedia lublin, bliznowiec po operacji ]