medycyna pracy bydgoszcz karłowicza godziny otwarcia

Łącznie, wyniki te doprowadziły nas do postulowania, że w komórkach WHIMWT zmiana produktu genu, takiego jak GRK, która kontroluje promowaną przez agonistę rekrutację (3-arestyny2 do CXCR4 może odpowiadać za upośledzoną endocytozę receptora. Internalizacja i desensytyzacja CXCR4 są selektywnie regulowane przez GRK3. Ostatnie prace ujawniły pewną specjalizację różnych GRK w regulacji sygnalizacji GPCR (26, 27), otwierając możliwość, że może tak być w przypadku tłumienia CXCR4. W fibroblastach WHIMWT, podobnie jak w komórkach kontrolnych, ekspresja GRK2, -5 lub -6 nie wywierała żadnego lub jedynie umiarkowany wpływ na indukowaną przez CXCL12 internalizację CXCR4 (Figura 4A). Co ciekawe, ekspresja GRK3 była wysoce skuteczna w przywracaniu prawidłowej endocytozy CXCR4 w fibroblastach od obu pacjentów (Figura 4, A i B). Przeciwnie, ekspresja GRK3 nie normalizowała internalizacji receptora CXCR41013 skróconego pod kątem C-ogonka ekspresjonowanego ektopowo w kontrolnych lub fibroblastach P3 (Figura 4B). Wyjaśnieniem dla tej obserwacji jest usunięcie przypuszczalnych miejsc docelowych dla fosforylacji za pośrednictwem GRK3 (ser338 / Ser339 i Ser341 / Thr342 pary i Ser344) w receptorze CXCR41013. Wyniki te silnie sugerują, że CXCR4 i GRK3 specyficznie oddziałują tak, że może zachodzić internalizacja receptora, otwierając tym samym możliwość, że zdolność egzogennego GRK3 do przywrócenia internalizacji CXCR4 w fibroblastach pacjentów jest związana z interakcjami kinazy z receptorem. Rycina 4: internalizacja i desensytyzacja CXCR4 za pośrednictwem GRK3. (A) Wyżej wymienione fibroblasty z pacjentów CTRL # 1, P3 i P4 eksprymujących CXCR4 nukleopowano 5 ug konstruktu pcDNA1 (wektor) lub GRK2, -3, -5 lub -6 i traktowano 15 godzin po transfekcji 200 nM CXCL12. Zawsze kontrolowaliśmy efektywność nadekspresji GRK według IB (Supplemental Figure 2C). (B) internalizowana CXCL12 CXCR4WT lub CXCR41013 w fibroblastach z CTRL nr i P3 zarodkowana za pomocą 5 (ig pcDNA1 (wektor) lub plazmid kodujący cDNA GRK3. (C) Ekspresja produktów GRK w fibroblastach od zdrowych osobników poddanych nukleoporacji za pomocą 5 .g siRNA SCR, GRK2 lub GRK3. Trzy dni po transfekcji poziomy mRNA GRK oceniano za pomocą ilościowej PCR (panele lewy i środkowy) i znormalizowano do poziomów IDUA. IB białek z całokomórkowych lizatów albo z mAb anty-GRK2 / 3 (dane nie pokazane) lub z anty-GRK2 lub anty-GRK3 Ab (prawy panel) ujawnił białka o oczekiwanej masie cząsteczkowej (~ 80 kDa). SiRNA GRK2 lub -3 nie wywierały wpływu na poziom ekspresji endogennego GRK6 lub a-arestyny2 (odpowiednio masa cząsteczkowa ~ 65 i ~ 46 kDa), co wykryto przy użyciu selektywnych Abs (Suplementowe Figury i 2). (D) Poziomy ekspresji CXCR4 w komórkach w fibroblastach transfekowanych GRK2 lub -3 siRNA traktowanych CXCL12. SiRNA GRK2 lub -3 nie miały wpływu na poziomy ekspresji CXCR4 na błonie niestymulowanych komórek (dane nie pokazane). (E) Transdukowane transfekowane cXCR4 fibroblasty z osobników CTRL nr 1, P3 i P4 nukleopowano 5 ug konstruktu pcDNA1 (wektor) lub GRK2 lub -3 i testowano pod kątem aktywowanej przez CXCL12 polimeryzacji aktyny. Wyniki to środki. SD z 3. 6 niezależnych doświadczeń (A i B, C, panele lewy i środkowy oraz D i E) lub reprezentatywne dla> 5 niezależnych oznaczeń (C, prawy panel). * P <0,05; #P <0,005 w porównaniu z fibroblastami transfekowanymi wektorami (A i B) lub siRNA SCR (C i D). Przez znoszenie mRNA GRK3 w fibroblastach kontrolnych, badaliśmy pozorną zależność internalizacji CXCR4 od aktywności GRK3. Równolegle tłumiliśmy także mRNA GRK2, ponieważ ta kinaza jest blisko spokrewniona z GRK3 (28) i znajduje się tutaj, aby regulować znacząco, choć nieznacznie, internalizację CXCR4 agonisty w komórkach kontrolnych (Figura 4A) [patrz też: bioimpedancja elektryczna, bańki chińskie allegro, logopedia lublin ]