przychodnie rehabilitacyjne szczecin

W związku z powyższym, stwierdziliśmy, że ekspresja p-arynyny2 w kontrolnych fibroblastach znacznie zwiększała internalizację CXCR4 promowaną przez CXCL12 (Figura 3A). Egzogenna a-arestyna2 także zachowała zdolność do modulowania endocytozy CXCR4 w fibroblastach i komórkach EBV-B (Figura 3A i dane nie pokazane, odpowiednio) od pacjentów WHIMWT, w przeciwieństwie do nadekspresjonowanej (3-aretyny1 (Figura 3B). Zatem, dane te potwierdzają niewielką rolę. -Arrestiny1 w regulacji internalizacji CXCR4 promowanej przez CXCL12 w porównaniu z. -Arrestin2 (8, 9, 17). Kwestia, czy upośledzona internalizacja CXCR4 w komórkach WHIMWT opiera się na zmianie poziomów a-parkynów została rozwiązana za pomocą analizy IB z użyciem rozpoznawania przez Abs p-azyryny2 i / lub (3 -aryny1 (Suplementalne Figury 1, A i B, materiał uzupełniający dostępny w Internecie z ten artykuł: doi: 10.1172 / JCI33187DS1). Wykazaliśmy, że poziomy. -Arwityna1 i (3-parkin2 w stanie równowagi w fibroblastach WHIMWT są podobne do tych wykrywanych w komórkach kontrolnych (Figura 3, A i B). Odkrycia te potwierdzono w komórkach EBV-B i pierwotnych leukocytach od obu pacjentów (Suplementowa Figura 1C) i rozszerzono do poziomu mRNA (dane nie pokazane). Ponieważ odkryto, że ORF. -Arrestiny1 i (3-parkyn2 są typu dzikiego we wszystkich typach komórek WHIMWT, nasze wyniki wskazują na normalną syntezę, stabilność i translację mRNA y-aretyny w tych komórkach. Łącznie odkrycia te kwestionują możliwość, że anomalie w a-arewieny odpowiadają za wadliwą internalizację CXCR4 w komórkach WHIMWT. Figura 3 przedstawia internalizację CXCR4 za pośrednictwem a-aretyny. (A i B) Transkrybowane przez CXCR4 fibroblasty od zdrowych osobników P3 i P4 nukleopowano 5. G pN1-EGFP (wektor), p. -ArrestinemA. EGFP (a-arrl) lub p. -Arrestin2. EGFP ( P-arr2) i traktowano 15 godzin po transfekcji 200 nM CXCL12 (lewe panele). Szybkości transfekcji> 60% uzyskano we wszystkich typach komórek ocenianych metodą cytometrii przepływowej. Wyniki wyrażono jako procent ekspresji CXCR4 (100% odpowiadającej ekspresji CXCR4 na powierzchni komórek GFP + inkubowanych w samej pożywce). Sondowanie ekstraktów białkowych anty – A – arrestiną lub A – arrestin2 ujawniło białka o oczekiwanej masie cząsteczkowej (~ 47 i ~ 46 kDa odpowiednio dla a-arestyny i -2) w każdej próbce (prawe panele). LDH (~ 35 kDa) zastosowano jako kontrolę obciążenia. (C) Poziomy ekspresji błonowej CXCR4WT lub CXCR41013 po stymulacji CXCL12 w fibroblastach CTRL nr nukleoporowanych 5. G pN1-EGFP (wektor) lub p. -Arrestiny2. EGFP. Po transdukcji receptory CXCR4WT i CXCR41013 eksprymowano na podobnych poziomach na powierzchni niestymulowanych komórek (dane nie pokazane). Wyniki to środki. SD z> 3 niezależnych eksperymentów (A. C) lub reprezentatywnych z> 3 niezależnych oznaczeń (A i B, prawe panele). * P <0,05; ** P <0,005 w porównaniu z fibroblastami transfekowanymi wektorem. Ponadto, normalne funkcjonowanie innych receptorów chemokin także wskazuje, że szlak endocytowy poniżej rekrutacji a-aretyny jest zachowany w komórkach WHIMWT. FG-zależna fosforylacja reszt C-tail Ser / Thr CXCR4 (18), a zatem integralność C-tail, jest wymagana do wiązania a-gryny i internalizacji receptora (8, 19. 21). Zatem upośledzona internalizacja zmutowanych C-tail-C skrótu CIMCR4 mutantów CXCR4 (6, 22) jest prawdopodobnie spowodowana usunięciem krytycznych miejsc akceptora fosfokretyny (5, 8, 23, 24). Wspierając to założenie, nadekspresja p-arestyny2, która w dużym stopniu przekracza poziomy endogenne (Suplementowa Figura 1B) i wiadomo, że przezwycięża potrzebę zależnej od GRK fosforylacji GPCR (25), nie sprzyja internalizacji receptora CXCR41013 związanego z WHIM ( Figura 3C), chociaż częściowo przywrócono CXCR4 typu dzikiego w komórkach pochodzących od pacjenta (Figura 3A) [patrz też: bańki chińskie allegro, allegro dla gołębi, badanie trus ]