regeneracja kości szczęki

Po IP przeprowadzono Western blot dla SOD1 i Rac1. Wykazano, że długie i krótkie ekspozycje błony SOD1 wykazują zwiększone wiązanie każdej ze zmutowanych form SOD1 do Rac1. (K) Testy Rac1 GTPazy przeprowadzono stosując natywną bydlęcą SOD1 lub wskazane bakteriobójcze oczyszczone ludzkie białka SOD1. Wskazano stosunek molowy Rac1 / SOD1. (L) Przebieg w czasie O2 zależny od NADPH. generowanie przez izolowane endosomy PMEF w obecności lub nieobecności 1. M ludzkiego SOD1WT lub SOD1L8Q. Ponieważ wiązanie Rac1 do SOD1 było kontrolowane przez stan redox Rac1, postawiliśmy hipotezę, że zdolność SOD1 do regulacji aktywności GTPazy Rac1 może również być regulowana redoks. Aby bezpośrednio ocenić, czy ROS zmieniają zdolność SOD1 do hamowania hydrolizy GTP przez Rac1, przeprowadziliśmy testy GTPazy w obecności oksydazy ksantynowej / ksantynowej (X / XO) O2 system generujący. Biorąc pod uwagę, że Rac1 reguluje O2. wytwarzanie przez pewne oksydazy NADPH, takie pytanie było potencjalnie istotne dla procesów, które regulują wytwarzanie ROS in vivo. Co ciekawe, SOD1 stracił zdolność do hamowania hydrolizy GTP przez Rac1 w obecności tego układu generującego ROS (Figura 3D). Jednak poziomy ROS generowane w naszych warunkach eksperymentalnych nie wpływały na wewnętrzną aktywność GTPazy Rac1 przy braku SOD1 (Figura 3D). IP kompleksów Rac1-GTPyS / SOD1 przy zastosowaniu warunków testu GTPazy wykazało, że ekspozycja na pochodzące od X / XO ROS oddzieliła SOD1 od Rac1 (Figura 3E). Te odkrycia wykazały, że ROS zmieniają zdolność SOD1 do regulowania aktywności GTPazy Rac1 przez kontrolowanie interakcji fizycznych między tymi 2 białkami. Te wyniki są zgodne ze zdolnością H2O2 do zakłócania interakcji SOD1 / Rac1 (Figura 2D). Rac1 i Rac2 są dobrze znane ze swojej zdolności do regulowania komórkowego O2 poprzez interakcje z Nox1 i Nox2gp91phox (7). Rac2 jest białkiem specyficznym dla krwiotwórczych i reguluje Nox2gp91phox w neutrofilach (23). Z drugiej strony, Rac1 jest wszechobecnym białkiem, które może regulować aktywność Nox1 (11, 24) oraz Nox2gp91phox w ludzkich monocytach (25) i komórkach linii mieloidalnej, takich jak mikroglej (26). Te interakcje umieściły Rac1 w centrum wielu regulowanych przez ROS procesów komórkowych kontrolowanych przez O2. i / lub H2O2, zdyskutowany produkt O2. (13, 27-30). Co ciekawe, ostatnio wykazaliśmy, że SOD1 jest rekrutowany na powierzchnię endosomów, które produkują zależną od Ox2 zależną od Nox2. po IL-1. aktywacja (12). To doprowadziło nas do postawienia hipotezy, że SOD1 aktywuje kompleksy Rac1 / Nox2 w przedziale endosomalnym w celu wytworzenia O2. przez hamowanie aktywności GTPazy Rac1. W tym celu wyizolowaliśmy niestymulowane endosomy zawierające Nox2 z pierwotnych mysich skórnych fibroblastów (PMDF) i zbadaliśmy, czy suplementacja SOD1 aktywuje zależny od NADPH O2. generowanie przez ten przedział. Aby potwierdzić endosomalny O2. rzeczywiście pochodził z Nox2, używaliśmy PMDF izolowanych z myszy Nox2gp91phox KO lub myszy z miotu kontrolnego WT. Rozdzielenie gradientu gęstości jodokanolu frakcji pęcherzyków z ciężkiego mitochondrialnego supernatantu WT wykazało 2 dominujące frakcje szczytowe zawierające białka Nox2gp91phox, Rac1 i SOD1 (frakcje 10 i 12), które nakładają się z małym pikiem w zależnym od NADPH O2 produkcja i wczesny marker endosomalny EEA1 (ryc. 3F). Dodanie oczyszczonego bydlęcego SOD1 do tych wyizolowanych endosomów doprowadziło do znacznego zwiększenia ich zdolności do wytwarzania O2 zależnego od NADPH. (Rysunek 3G). To ulepszenie endosomalnego O2. był wrażliwy na DPI, inhibitor Nox i nie był obserwowany w PMO Nox2gp91phox KO (rysunek 3G), sugerując, że O2. rzeczywiście pochodzi od Nox2
[więcej w: bartoneloza, alfa pvp skutki uboczne, pieprzyca siewna ]