salmed łódź

W świeżo izolowanych LSECs od zdrowych dawców, 5% było w trakcie apoptozy, jak wykazał TUNEL, podczas gdy 23% świeżo izolowanych LSEC od dawców miesiąc po MCT było dodatnich dla TUNEL, P <0,001 (dodatkowa Figura 2). Przeprowadziliśmy również badania u wcześniej traktowanych MCT biorców FVB / N z przeszczepieniem LSEC z dawców FVB / N-Tie2 . GFP leczonych 2 tygodnie wcześniej MCT. Te komórki dawcy traktowane MCT wszczepiono do wątroby i wykazywały odpowiednie markery śródbłonka (Figura 5, A i B). Jednak zdolność tych komórek do proliferacji była znacznie upośledzona (Figura 5C). Analiza ilościowa resekowanych przeszczepionych komórek wykazała, że tydzień po transplantacji komórek, wszczepienie FVB / N-Tie2. GFP LSEC z dawców traktowanych MCT było co najmniej 10-krotnie niższe niż u zdrowych dawców LSEC, 0,1% vs. 1,3% przeszczepionych LSEC w NPC za pomocą cytometrii przepływowej, P <0,001 (fig. 5D i tabela 2). Podobnie, miesiąc po transplantacji komórek, 10-krotnie mniej przeszczepionych LSEC odzyskano od dawców traktowanych MCT w porównaniu ze zdrowymi dawcami. U zwierząt traktowanych MCT, w których nie wszczepiono żadnych komórek, zaobserwowano powszechną apoptozę w sinusoidalnych komórkach wątroby, która różniła się od zwierząt, w których przeszczepione LSEC poddawano rozległej proliferacji (Suplementowa Figura 3, D. F). W celu identyfikacji frakcji komórkowych poddawanych cyklom, wykonano barwienie Ki67. W prawidłowej wątrobie myszy EC nie wyrażały Ki67. Przeciwnie, u myszy traktowanych MCT, w których przeszczepione komórki ulegały proliferacji, komórki sinusoidalne wątroby wyrażały Ki67 w znacznym stopniu tydzień, a także miesiąc po przeszczepie komórek (Suplementowa Figura 4, FłH). Dlatego też doszliśmy do wniosku, że MCT osłabiło zdolność rodzimych LSEC do przeżycia i proliferacji, zapewniając tym samym korzyści przeszczepionym LSEC w wątrobie. Ryc. 5 Zaburzenia wywołane przez MCT w natywnych LSEC. Analiza wątroby z myszy otrzymujących FVB / N poddanych wstępnej obróbce MCT po przeszczepie LSECs od myszy dawcy FVB / N-Tie2 . GFP, które również potraktowano MCT 2 tygodnie przed wyizolowaniem komórek do przeszczepu. (A) Skrawki tkanki wybarwiono immunologicznie przeciwciałami GFP (zielone) i F4 / 80 (czerwone) tydzień po transplantacji komórek. (B) Większy obraz GFP i CD31 w powiększeniu w przekroju myszy tydzień po transplantacji komórek. Strzałki wskazują przeszczepione na obecność GFP LSEC wykazujące CD31. (C) Immunobarwione w celu identyfikacji przeszczepionych LSEC z GFP (zielony) wraz z markerem śródbłonka CD31 (czerwony) miesiąc po transplantacji komórki. (D) Analiza FACS traktowanych MCT FKB / N-Tie2a GFP przeszczepionych LSECs odzyskanych tydzień i miesiąc po transplantacji. Tożsamości LS31 CD31 + / GFP dla typowych markerów śródbłonka, endoglinu i Flk-1 oraz markera mieloidowego CD11b przedstawiono na ostatnich 6 poletkach LSEC wyizolowanych od myszy tydzień po transplantacji komórek. Jądra barwione DAPI (niebieskie). Oryginalne powiększenie, × 200 (A, C); × 630 (B). Pasek skali: 10 .m (B). Tabela 2 Odzyskiwanie przeszczepionych komórek Mechanizmy te dostarczyły odpowiednie systemy eksperymentalne do adresowania do ponownego zasiedlenia przedziału śródbłonkowego, chociaż wymagane dodatkowe korzyści wynikające z włączenia cyklofosfamidu wymagały rozważenia. U myszy FVB / N leczonych samym cyklofosfamidem przeszczepione LSEC nie proliferowały, co wskazuje, że sam cyklofosfamid nie był odpowiedzialny za ten efekt (Figura 2B). Krótkotrwałe testy in vitro wykazały, że cyklofosfamid nie zwiększa cytotoksyczności indukowanej przez MCT w LSEC (suplement 5). Jednakże, ponieważ cyklofosfamid może nie być toksyczny dla hodowanych LSEC bez hepatocytów (26), nie można wykluczyć możliwości różnych efektów in vivo. Funkcja przeszczepionych zdrowych LSECs u myszy hemofilia A NOD / SCID [hasła pokrewne: ashwagandha skutki uboczne, bioimpedancja elektryczna, neurologopedia lublin ]