września piastów 16

Nasze badania jednoznacznie wykazały, że LSEC są głównym źródłem FVIII. W przypadku celowanej terapii komórkowej i genowej w hemofilii A, identyfikacja typu (-ów) komórek zdolnych do wytwarzania FVIII będzie miała ogromną wartość. Chociaż przeszczepienie całej wątroby u osób z hemofilią A szybko doprowadziło do przywrócenia aktywności FVIII w osoczu, wspierając rolę wątroby w syntezie FVIII (41), specyficzne typy komórek odpowiedzialne za wytwarzanie FVIII pozostawały nieuchwytne, ponieważ mRNA FVIII było wyrażany w hepatocytach, LSEC i makrofagach (2, 12, 29). Specyficzne pochodzenie FVIII typu komórki nie zostało rozwiązane przez dalsze badania, ponieważ przeszczep zdrowych LSAEC (29), śledziony płodu zawierających śródbłonek naczyniowy (28) i hepatocyty (42) uratowały myszy hemofilię A. MRNA FVIII jest szczególnie dobrze wyrażany w hepatocytach i LSEC, chociaż testy ilościowe wykazały większą ekspresję mRNA w tym ostatnim (2). Uważamy, że LSEC są głównym źródłem białka FVIII, ponieważ przeszczepienie LSEC u myszy z hemofilią A przywróciło poziomy aktywności FVIII w osoczu do 14% . 25% normy, co korelowało z rozmiarem, w którym wątrobowy śródbłonek został zastąpiony przez przeszczepione LSEC. Warto zauważyć, że te poziomy aktywności czynnika VIII w osoczu eliminują spontaniczne krwawienie w hemofilii A. Żadne inne główne komórki typu zdolne do produkcji FVIII nie zostały przeszczepione w naszych badaniach. Podczas gdy poziom czynnika VIII w osoczu może pochodzić z dodatkowych źródeł, np. Pochodzącego z komórek obwodowych jednojądrzastego EC (11) lub mikronaczyniowych EC (43), LSEC mają wewnętrzną zaletę jednoczesnej syntezy, sekwestracji i uwalniania vWF, który stabilizuje i chroni FVIII. przeciwko przedwczesnej degradacji lub inkorporacji komórkowej (44). Co więcej, LSEC odgrywają rolę w immunoregulacji, która mogłaby zostać wykorzystana w celu uniknięcia szkodliwej odpowiedzi immunologicznej przeciwko FVIII (3). Dlatego zdolność przeszczepionych zdrowych LEPEC do leczenia niedoboru FVIII w hemofilii A powinna oferować ekscytujące nowe podejścia terapeutyczne. Rozwój zastosowań klinicznych z przeszczepionymi EC do rekonstrukcji naczyniowej powinien ułatwić identyfikacja skutecznych źródeł komórek dawcy. Ponieważ dostępność ludzkich narządów dawcy jest ograniczona, należy rozważyć, czy komórki dawcy mogą pochodzić z alternatywnych źródeł, w tym komórek macierzystych. Możliwość zastosowania genetycznie zmodyfikowanych autologicznych komórek macierzystych po odpowiedniej ekspansji in vitro może pomóc w uniknięciu problemów związanych z allograftem. Metody Zwierzęta i procedury. Komitet ds. Pielęgnacji i Użytkowania Zwierząt w College of Medicine Alberta Einsteina zatwierdził wykorzystanie zwierząt zgodnie z przewodnikiem National Research Council w zakresie opieki nad zwierzętami laboratoryjnymi i ich wykorzystywania (publikacja United Health Public Service, zrewidowana w 1996 r.). Stosowano myszy w wieku 7-10 tygodni. TgN (TIE2GFP) 287Sato / J myszy transgeniczne na podłożu FVB / NJ (Jackson Laboratory) służyły jako dawcy komórek. Po początkowych badaniach mających na celu opracowanie procedur izolacji komórek, myszy 20 TgN (TIE2GFP) 287Sato / J zastosowano do przeszczepiania komórek myszami FVB / N (National Cancer Institute) służącymi jako biorcy komórek syngenicznych (n = 22 dla końcowych badań). Myszy Hemophilia A zostały pierwotnie wytworzone przez rozbicie genu FVIII przez wstawienie kasety z genem neomycyny w 3. koniec eksonu 16 (27). Aby wytworzyć myszy hemofilia A z NOD / SCID, przeszczepiono krzyżowo 10 pokoleniom samic myszy hemofilii A na tle 129-C57BL / 6J samcom myszy NOD.CB17-Prkdcscid / J (Jackson Laboratory). Zweryfikowaliśmy genotyp myszy z nokautem hemofilii metodą PCR, jak opisano (27). W celu wykazania korekty terapeutycznej wykorzystano 32 myszy hemofilii A NOD / SCID jako biorców zdrowych LSEC z myszy transgenicznych TgN (TIE2GFP) 287Sato / J (n = 20)
[podobne: artefakty ruchowe, ashwagandha skutki uboczne, allegro pontony ]